Определение билирубина в крови на биохимическом анализаторе ROKI
Принцип метода: прямой (связанный, конъюгированный с глюкуроновой кислотой) билирубин непосредственно реагирует с диазотированной сульфаниловой кислотой, а общий билирубин – в присутствии кофеинового реагента с образованием окрашенного азосоединения. Интенсивность окраски реакционной среды пропорциональна концентрации билирубина и измеряется фотометрически при длине волны 535нм (500-560нм).
Исследуемый материал: сыворотка крови без следов гемолиза. Пробы стабильны 2 часа при комнатной температуре в защищенном от света месте.
Состав набора:
Реагент №1: Кофеиновый реагент (200мл).
Реагент №2: Сульфаниловая кислота (55мл).
Реагент №3: Натрия нитрит (2мл).
Реагент №4: Физиологический раствор (250мл).
Калибратор: 85,5мкмоль/л (в 2мл дистиллированной воды).
Подготовка реагентов к процедуре анализа и их стабильность:
Диазореактив: смешайте реактивы №2 и №3 в соотношении 100:2,5. Хранить в посуде из темного стекла при температуре 2-80С.
Содержимое флакона с калибратором растворите в 2мл дистиллированной воды. После полного растворения концентрация билирубина равна 85,5мкмоль/л. Хранить в защищенном от света месте при температуре 2-80С.
Процедура анализа:
|
Опытная проба |
Контрольная проба |
Калибровочная проба | ||
|
Общий билирубин |
Прямой билирубин | |||
|
Сывортка, мл Реагент №1 Реагент №4 Калибратор Диазореагент |
0,2 1,4 0,2 - 0,2 |
0,2 - 1,6 - 0,2 |
0,2 - 1,8 - - |
- 1,4 0,2 0,2 0,2 |
Пробы тщательно перемешайте. Для определения прямого билирубина точно через 5 минут (при комнатной температуре) измерьте величину экстинкции опытной пробы против соответствующей контрольной пробы при 535нм (500-560нм). Для определения общего билирубина через 20 минут (при комнатной температуре) измерьте величину экстинкции опытной пробы против соответствующей контрольной пробы при 535нм (500-560нм). Экстинкцию калибратора измерьте против дистиллированной воды через 20 минут при 535нм.
Расчет концентрации билирубина в пробе (С):
, где
Епробы – экстинкция опытной пробы;
Екалибр - экстинкция калибровочной пробы;
85,5 – концентрация билирубина в калибраторе.